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13611710102更新時間:2022-02-11 瀏覽次數(shù):2383
一、簡介
蛋白質(zhì)的測定方法,目前仍以1883年凱達(dá)爾氏(Kiedahl)發(fā)明的定氮法為基礎(chǔ),它根據(jù)各種蛋白質(zhì)都具有固定比數(shù)的氮這一事實,通過對氮的測定而推算出蛋白質(zhì)含量,此法所得的含氮量除了確定屬于蛋白質(zhì)組成成分的氮以外,還包括非蛋白質(zhì)組成的其他有機(jī)及無機(jī)態(tài)氮,所以換算所得的蛋白質(zhì)含量稱作為粗蛋白含量,一般蛋白質(zhì)中的含量為18%,換算后即每6.25克蛋白質(zhì)中含有1克氮,因此6.25成為換算系數(shù)K,但是不同的農(nóng)產(chǎn)品及其制品的實際含氮量有區(qū)別,所以不同農(nóng)產(chǎn)品必須采用不同的換算系數(shù),如花生、大豆、蠶豆、大麥、小麥、燕麥、黑麥等含氮為17.6%,求得K=5.7,蕎麥、葵花籽、亞麻籽、麻籽、棉花籽、蓖麻籽等換算系數(shù)則為K=5.50,玉米、菜籽為6.00,水稻為5.95,上述以外的其他農(nóng)產(chǎn)品的換算系數(shù)均適用6.25。盡管如此,目前世界上還沒有直接分離測定含蛋白質(zhì)的可行方法。因此,迄今為止在國內(nèi)外凱氏定氮法仍然是測定蛋白質(zhì)含量的經(jīng)典方法。所得結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定。
上海密通儀器有限公司生產(chǎn)的全自動定氮儀(蛋白質(zhì)測定儀),是引進(jìn)消化吸收國內(nèi)外檢測新技術(shù),結(jié)合我國國情,應(yīng)用凱氏定氮法原理,采用化學(xué)與物理學(xué)相結(jié)合完成的成套蛋白質(zhì)含量快速測定裝置。為糧食、食品、飼料、農(nóng)業(yè)、商檢等檢測部門提供了理想的檢測設(shè)備。
二、操作方法 上海密通儀器有限公司廠家直供
1.試劑制備
A.硫酸(比重1.84)
B.NaOH溶液:400g NaOH 溶于1000mlH2O中
C.2%H3BO3
D.0.1NHCL
E. 催化劑:硒+無水硫酸鈉(1:1000)或硫酸銅等
F.指示劑:0.1%甲基紅+0.5%溴甲酚綠(1:1)
2.樣品消化
稱取經(jīng)粉碎通過40-60目/寸樣0.5-1克(視含氮量而定)無損地置入已洗滌烘干的消化管中加催化劑5克左右和10ml左右硫酸。 將消化管分別放入消化架各個孔內(nèi),然后置于消化爐上,然后開啟抽氣三通上自來水龍頭,使抽氣三通處于吸氣狀態(tài),接通電源,在加熱初始階段防止樣品飛濺。(選用電壓型控溫的消化爐起先控制在150伏左右,15分鐘左右后可滿電壓工作),(選用數(shù)顯型消化爐起先控制在200度左右,20分鐘左右后再設(shè)定所需溫度)。
3.蒸餾(結(jié)構(gòu)圖上有Δ標(biāo)記工作必需做)
(ST-O4A為例)蒸餾器中,堿液及蒸餾水采用電磁泵加入,機(jī)器側(cè)面標(biāo)簽NaOH、H2O注入接口用橡膠管套入后分別置入自備的容器中,加液時按面板上相應(yīng)開關(guān),液體由泵吸入消化管內(nèi),注入毫升數(shù)視標(biāo)尺所注位置而定。(一般堿液加量是消化時硫酸用量5倍以上,加蒸餾水量15毫升左右)
1.打開電源,打開自來水龍頭,接冷卻水自來水龍頭不必開過大,出水口有水流出即可,用排水管子上夾子夾緊排水管子。
開面板上右邊蒸氣開關(guān)手柄往上推為開蒸氣,同時把左邊進(jìn)水開關(guān)手柄往上推為開,待電流表指針指在1A—2A時如果水進(jìn)入側(cè)面蒸發(fā)爐慢,電流表長時間沒反應(yīng),請用吸合球往正面的細(xì)長管內(nèi)吹幾下以排除管內(nèi)空氣,看示意圖指示馬上關(guān)把左邊進(jìn)水開關(guān)手柄往下壓,壓到底壓不下為關(guān)(盡量不要關(guān)太慢,防止電流過大而燒壞15A保險絲),待蒸氣管噴出氣后又上推打開左進(jìn)水開關(guān)供水,2分鐘左右后電流穩(wěn)定在3.5A-6A左右后,關(guān)閉右蒸氣開關(guān)手柄往下壓到底,壓不下為關(guān)。因為紅色進(jìn)水開關(guān)是控制機(jī)器內(nèi)部產(chǎn)生蒸氣的水源開關(guān),從側(cè)面的有機(jī)玻璃窗口內(nèi)可以看到蒸發(fā)爐水位的高低,防止水位過高,因為一開始水沒有沸騰,水不斷進(jìn)入,容易使電流過大而燒壞保險絲。蒸氣開關(guān)是起通斷蒸氣作用,也是水源進(jìn)入蒸發(fā)爐和排除蒸發(fā)爐水(實驗結(jié)束時)的排水器件。(如果蒸氣出來后電流不大請開關(guān)一下紅色蒸氣開關(guān)會正常。(上推為開,下壓為關(guān)))
2.在250mL三角接收瓶中加入50mL2%H3BO3和2-3滴混合指示劑,蒸餾時間設(shè)定6-8分鐘,并使接收瓶托架盤往上移,使滴管浸沒在液體中,然后按時控開關(guān)(也可不用開)。
3.向上扳動側(cè)面紅球手柄把消化管固定在左邊托架上,然后按面板上開關(guān)分別加入H2O、NaOH 液體,然后上推蒸氣開關(guān),向試管內(nèi)注入蒸氣,進(jìn)行蒸餾樣品,在接收瓶內(nèi)接收液達(dá)150mL左右時移下接收瓶,用蒸餾水沖洗滴管口繼續(xù)蒸餾半分鐘,然后取下接收瓶,待滴定用,關(guān)蒸氣開關(guān)。第二個樣品只要放上后,加好液,上推蒸氣開關(guān)既可,不要關(guān)電源。
4.滴定.
用0.1NHCL滴定接收瓶內(nèi)的溶液,滴定溶液由綠色變成淡紫色時為止,記下消耗HCL的毫升數(shù),按下列式子計算蛋白含量:
蛋白含量(%)=(V-V0)N 0.014 A 100
————————————
W
式中:V----消耗HCL的毫升數(shù)
V0-----空白實驗時消耗HCL的毫升數(shù)
N----- HCL的當(dāng)量濃度
0.014----1ml HCL的克當(dāng)量數(shù)
A---固定系數(shù)(6.25、5.7、5.3等)
W----試樣重量g (空白測定:用0.1克糖代替樣品或不加樣品作空白測定)
4、關(guān)機(jī)
關(guān)電源、關(guān)水龍頭、打開排水夾子,兩紅球開光上推,取下消化管,擦干凈機(jī)器。
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